微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義

　　微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)篇一：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義(基礎(chǔ))

　　微生物學(xué)類實(shí)驗(yàn)講義

　　(適用專業(yè)：生物工程、生物技術(shù)、生物科學(xué))

　　北方民族大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院

　　2010年制定

　　1實(shí)驗(yàn)?zāi)夸?/strong>

　　微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)規(guī)則和安全……………………………………3

　　實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)與準(zhǔn)備………………………………5

　　實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)九實(shí)驗(yàn)十顯微鏡油鏡的使用與細(xì)菌染色…………………………………10

　　細(xì)菌芽孢、莢膜的染色及其認(rèn)識(shí)………………………………17

　　顯微鏡測(cè)微技術(shù)及細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性觀察……………………………19

　　酵母菌個(gè)體、群體形態(tài)觀察，血球板顯微鏡計(jì)數(shù)技術(shù)…22

　　放線菌個(gè)體、群體形態(tài)觀察……………………………………24

　　霉菌個(gè)體、群體形態(tài)觀察………………………………………25

　　培養(yǎng)基的配制及濕熱滅菌，玻璃器皿的干熱滅菌……………27

　　微生物的分離與純化……………………………………………31

　　理化因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響，生長(zhǎng)譜法測(cè)定微生物營(yíng)養(yǎng)要求……33

　　2微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)規(guī)則和安全

　　普通微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課的目的是：訓(xùn)練學(xué)生掌握微生物學(xué)最基本的操作技能，了解微生物學(xué)的基本知識(shí)，加深理解課堂講授的某些微生物學(xué)理論。同時(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)學(xué)生觀察、思考、提出問(wèn)題、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力，實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度以及敢于創(chuàng)新的開(kāi)拓精神；樹(shù)立勤儉節(jié)約、愛(ài)護(hù)公物的`良好作風(fēng)。

　　微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室是一個(gè)嚴(yán)肅的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所，雖然普通微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)所用的微生物材料一般為非致病菌或條件致病菌，但許多微生物是否具有致病性不是絕對(duì)的，與其數(shù)量、條件、感染途徑等有關(guān)，所以在實(shí)驗(yàn)操作中，必須將所有的微生物培養(yǎng)物都看成是具有潛在致病性的。

　　3為了上好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課，并保證安全，特制定如下規(guī)則和安全措施：

　　1．每次實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行充分預(yù)習(xí)，以了解實(shí)驗(yàn)的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)，思路清楚。

　　2．在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須穿上實(shí)驗(yàn)服，留長(zhǎng)發(fā)者，必須將長(zhǎng)發(fā)挽在背后。實(shí)驗(yàn)臺(tái)上除了記錄本和筆(記錄筆和記號(hào)筆)以外，不準(zhǔn)堆放任何個(gè)人物品。

　　3．認(rèn)真及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄，對(duì)于當(dāng)時(shí)不能得到結(jié)果而需要連續(xù)觀察的實(shí)驗(yàn)，則需記下每次觀察的現(xiàn)象和結(jié)果，以便分析。

　　4．實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持整潔，勿高聲談話和隨便走動(dòng)，保持室內(nèi)安靜。

　　5．實(shí)驗(yàn)時(shí)小心仔細(xì)，全部操作應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，禁止用嘴吸取菌液或試劑，萬(wàn)一遇有盛菌試管或瓶不慎打破、皮膚破傷等意外情況發(fā)生時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，及時(shí)處理，切勿隱瞞。

　　6．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，切勿使乙醇(酒精)乙醚、丙酮等易燃藥品接近火焰。如遇火險(xiǎn)，應(yīng)先關(guān)掉火源，再用濕布或沙土掩蓋滅火。必要時(shí)用滅火器。

　　7．使用顯微鏡或其他貴重儀器時(shí)，要求細(xì)心操作，特別愛(ài)護(hù)。顯微鏡的目鏡在使用前后必須用浸有乙醇(酒精)的透鏡紙擦凈。對(duì)消耗材料和藥品等要力求節(jié)約，用畢后仍放回原處，嚴(yán)禁將藥匙交叉使用。

　　8．每次實(shí)驗(yàn)完畢后，必須把所用儀器抹凈放妥，將實(shí)驗(yàn)室收拾整齊，擦凈桌面，如有菌液污染桌面或其他地方時(shí)，可用3%來(lái)蘇爾液或5%石炭酸液覆蓋半小時(shí)后擦去，如系芽孢桿菌，應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)消毒時(shí)間。凡帶菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗滌前須浸泡在3%來(lái)蘇爾液中進(jìn)行消毒。

　　9．每次實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行培養(yǎng)的材料，應(yīng)標(biāo)明自己的組別及處理方法，放于教師指定的地點(diǎn)進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室中的菌種和物品等，未經(jīng)教師許可，不得攜出室外。

　　10．每次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)以實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度填入報(bào)告表格中，力求簡(jiǎn)明準(zhǔn)確，認(rèn)真回答思考題，并及時(shí)匯交教師批閱。

　　11．離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前將手洗凈，注意關(guān)閉門窗、燈、火、煤氣等。

　　4實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)與準(zhǔn)備

　　一、目的要求

　　1．了解微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本概念，認(rèn)識(shí)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本材料。

　　2．熟悉微生物實(shí)驗(yàn)所需各種常用器皿的名稱和規(guī)格。

　　3．學(xué)會(huì)正確的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法，為實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

　　4．熟讀與牢記微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)規(guī)則和安全。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　為了保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，要求把實(shí)驗(yàn)所用器皿清洗干凈，保持滅菌后無(wú)菌狀態(tài)，需要對(duì)培養(yǎng)皿、吸管等進(jìn)行妥善包扎，試管和三角瓶要做棉塞。清洗方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⑵髅蟮姆N類、所盛放的物品、洗凈劑的類別和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。

　　三、實(shí)驗(yàn)器材

　　1．常用的各種玻璃器皿(三角瓶、移液管、試管、吸管、培養(yǎng)皿、玻片)。

　　2．洗滌工具和去污粉、肥皂、洗滌液。

　　3．接種工具、棉花、紗布、棉線等。

　　四、操作步驟(一)玻璃器皿的認(rèn)識(shí)

　　1．試管：微生物實(shí)驗(yàn)室所用的玻璃試管，根據(jù)其大小和用途不同，有下列三種型號(hào)：

　　(1)大試管(約18mm×180mm)：可裝倒平板用的培養(yǎng)基，也可作制備斜面用(需要大量菌體時(shí)用)和裝液體培養(yǎng)基用于微生物的振蕩培養(yǎng)。

　　(2)中試管[(13～15)mm×(100～150)mm]：裝液體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌或做斜面用，也可用于細(xì)菌、霉菌、病毒等的稀釋和血清學(xué)試驗(yàn)。

　　(3)小試管[(10～12)mm×100mm]：一般用于糖發(fā)酵或血清學(xué)試驗(yàn)，和其它需要節(jié)省材料的試驗(yàn)。

　　2．德漢氏小管

　　觀察細(xì)菌在糖發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)是否產(chǎn)氣時(shí)，在小試管內(nèi)倒置一小套管(約6mm×36mm)(圖1)，此小套管即德漢氏小管，又稱發(fā)酵小倒管。

　　3．小塑料離心管

　　微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)篇二：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

　　實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)室和人體表面微生物的檢查

　　一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

　　1證明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與體表存在微生物

　　2比較來(lái)自不同場(chǎng)所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型

　　3體會(huì)無(wú)菌操作的重要性

　　二實(shí)驗(yàn)原理

　　平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來(lái)源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，1-2d內(nèi)每一菌體能通過(guò)很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)可見(jiàn)的細(xì)胞群體的集落，稱為菌落。每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小、表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑等。因此可通過(guò)平板培養(yǎng)基來(lái)檢查環(huán)境中微生物的數(shù)量和類型。

　　三、器材

　　1、培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂平板

　　2、儀器或其他用具無(wú)菌水、滅菌棉簽（裝在試管內(nèi)），接種環(huán)，試管架，酒精燈，記號(hào)筆，廢物缸。

　　四、操作步驟

　　1、寫(xiě)標(biāo)簽

　　任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)，在動(dòng)手操作前均需首先將器皿用記號(hào)筆做上記號(hào)（包括班級(jí)、姓名、日期、樣品來(lái)源等），字盡量小些，寫(xiě)在皿底的一邊，不要寫(xiě)在當(dāng)中，以免影響觀察結(jié)果。

　　注：培養(yǎng)皿的記號(hào)一般寫(xiě)在皿底上，如果寫(xiě)在皿蓋上，同時(shí)觀察兩個(gè)以上培養(yǎng)皿的結(jié)果，打開(kāi)皿蓋時(shí)容易混淆。

　　2、實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌檢查

　　（1）空氣

　　將一個(gè)肉膏蛋白胨瓊脂平板放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，移去皿蓋，使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中，將另一塊肉膏蛋白胨瓊脂平板放在潔凈工作臺(tái)內(nèi)或無(wú)人走動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室中，移去皿蓋，1h后蓋上兩個(gè)皿蓋。

　　（2）實(shí)驗(yàn)臺(tái)

　�、儆糜浱�(hào)筆在皿底外面中央畫(huà)一直線，再在此線中間處畫(huà)一垂直線。

　　②取棉簽

　　左手拿含有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無(wú)名指夾持棉塞，將其取出，將管口很快地通過(guò)酒精燈的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。放回棉塞，并將空試管放在試管架上。

　�、叟獫衩藓�

　　左手取滅菌水試管，如上法拔出棉塞并燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水面，在管壁上擠壓一下以除去過(guò)多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，放回棉塞，并將滅菌水試管放在試管架上。

　　④取樣將濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或門旋鈕上擦拭約2cm2的范圍。

　�、萁臃N在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開(kāi)啟成一縫。再將棉簽伸入，在瓊脂表面頂端接種（滾動(dòng)一下），立即閉合皿蓋。將原放棉簽的空試管拔出棉塞，燒灼管口，插入用過(guò)的棉簽，將試管放回試管架。

　　⑥劃線

　　另取接種環(huán)在火焰上滅菌，先將環(huán)端燒熱，然后將接種環(huán)提起垂直放在火焰上，以使火焰接觸金屬絲的范圍廣一些，待接種環(huán)燒紅，再將接種環(huán)斜放，沿環(huán)向上，燒至可能碰到培養(yǎng)皿的部分，再移向環(huán)端，如此很快地來(lái)回通過(guò)火焰數(shù)次。

　　左手拿起平板，同樣開(kāi)啟一縫，將滅過(guò)菌并冷卻了的接種環(huán)（可在瓊脂表面邊緣空白處試溫度，若發(fā)出濺潑聲，表示太燙），通過(guò)瓊脂頂端的接種區(qū)，向下劃線，直到平板的一半處。注意：接種環(huán)與瓊脂表面的角度要小，移動(dòng)的壓力不能太大，否則會(huì)刺破瓊脂。

　　閉合皿蓋，左手將平板向左轉(zhuǎn)動(dòng)至空白處，右手拿的接種環(huán)再在火焰上燒灼，使冷。接種環(huán)通過(guò)前面劃的線條再在瓊脂的另一半，從上向下來(lái)回劃線至1／2處。

　　燒灼接種環(huán)，轉(zhuǎn)動(dòng)平板，劃最后1／4，立刻蓋上皿蓋，燒灼接種環(huán)，放回原處。

　　整個(gè)劃線操作均要求無(wú)菌操作，即靠近火焰，而且動(dòng)作要快。

　　3、人體細(xì)菌的檢查

　�。�1）手指（洗手前與洗手后）

　�。�2）鼻腔按照實(shí)驗(yàn)臺(tái)檢查法的步驟②，取出棉簽，并將其弄濕。用濕棉簽在鼻腔內(nèi)滾動(dòng)數(shù)次，按實(shí)驗(yàn)臺(tái)檢查法的步驟⑤和⑥接種與劃線，然后蓋上皿蓋。

　　4、將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底朝上，放37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)1-2d

　　5、結(jié)果記錄方法

　　（1）菌落計(jì)數(shù)在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數(shù)平板最后1/4面積內(nèi)的菌落數(shù)，不是劃線的平板，也一分為四，數(shù)1/4面積的菌落數(shù)。

　　（2）根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。

　　菌落特征：大小、顏色、干濕情況、形態(tài)、高度、透明程度、邊緣。

　　菌落特征描寫(xiě)方法如下：

　�、俅笮〈�、中、小、針尖狀�？上葘⒄麄�(gè)平板上的菌落粗略觀察一下，再?zèng)Q定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個(gè)大小范圍。

　�、陬伾�黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。

　　③干濕情況干燥、濕潤(rùn)、粘稠。

　�、苄螒B(tài)圓形、不規(guī)則等。（e）高度扁平、隆起、凹下。

　�、萃该鞒潭韧该�、半透明、不透明。

　�、捱吘壵�齊、不整齊。

　　五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　P13：結(jié)果1、思考題3、4

　　1、比較各種來(lái)源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數(shù)與菌落類型最多？

　　2、人多的實(shí)驗(yàn)室與無(wú)菌室（或無(wú)人走動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室）相比，平板上的菌落數(shù)與菌落類型有什么區(qū)別？你能解釋一下造成這種區(qū)別的原因嗎？

　　3、通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，在防止培養(yǎng)物的污染與防止細(xì)菌的擴(kuò)散方面，你學(xué)到些什么？有什么體會(huì)？

　　六、實(shí)驗(yàn)總結(jié)

　　實(shí)驗(yàn)二、細(xì)菌簡(jiǎn)單染色和普通光學(xué)顯微油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)觀察

　　一、目的要求

　　1．學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的單染色方法及無(wú)菌操作技術(shù)。

　　2．熟悉普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及各部分的功能。

　　3．學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法。

　　二、油鏡物鏡的基本原理

　　微生物學(xué)研究用的顯微鏡的物鏡通常有低倍物鏡（16mm，10×）、高倍物鏡（4mm，40～45×）和油鏡（1.8mm，95～100×）三種。油鏡通常標(biāo)有黑圈或紅圈，也有的以“OI（oilimmer-sion）字樣表示，它是三者中放大倍數(shù)最大的。根據(jù)使用不同放大倍數(shù)的目鏡，可使被檢物體放大1000～2000多倍。油鏡的焦距和工作距離（標(biāo)本在焦點(diǎn)上看得最清晰時(shí)，物鏡與樣品之間的距離）最短，光圈則開(kāi)得最大，因此，在使用油鏡觀察時(shí)，鏡頭離標(biāo)本十分近，需特別小心。使用時(shí)，油鏡與其他物鏡的不同是載玻片與物鏡之間不是隔一層空氣，而是隔一層油質(zhì)，稱為油浸系。這種油常選用香柏油，因香柏油的折射率n=1.52，與玻璃相同。當(dāng)光線通過(guò)載玻片后，可直接通過(guò)香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射。如果玻片與物鏡之間的`介質(zhì)為空氣，則稱為干燥系，當(dāng)光線通過(guò)玻片后，受到折射發(fā)生散射現(xiàn)象，進(jìn)入物鏡的光線顯然減少，這樣就減低了視野的照明度。

　　利用油鏡不但能增加照明度，更主要的是能增加數(shù)值孔徑，因?yàn)轱@微鏡的放大效能是由其數(shù)值孔徑?jīng)Q定的。所謂數(shù)值孔徑，即光線投射到物鏡上的最大角度（稱為鏡口角）的一半正弦，乘上玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率所得的乘積，可用下列公式表示：

　　NA＝n·sinα式中NA=數(shù)值孔徑；n=介質(zhì)折射率；α=最大入射角的半數(shù)，即鏡口角的半數(shù)。因此，光線投射到物鏡的角度愈大，顯微鏡的效能就愈大，該角度的大小決定于物鏡的直徑和焦距。

　　所謂單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形態(tài)的觀察。在中性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，所以常用堿性染料進(jìn)行染色。堿性染料并不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時(shí)染料離子帶正電，易與帶負(fù)電荷的細(xì)菌結(jié)合而使細(xì)菌著色。例如，美藍(lán)（亞甲藍(lán)）實(shí)際上是氯化亞甲藍(lán)鹽（methylenebluechloride，縮寫(xiě)為MBC），它可被電離成正、負(fù)離子：MBC→methyleneblue++chloride-帶正電荷的染料離子可使細(xì)菌細(xì)胞染成藍(lán)色。常用的堿性染料除美藍(lán)外，還有結(jié)晶紫（crystalviolet）、堿性復(fù)紅（basicfu-chsin）、番紅（又稱沙黃，safranine）等。細(xì)菌體積小，較透明，如未經(jīng)染色常不易識(shí)別，而經(jīng)著色后，與背景形成鮮明的對(duì)比，使易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

　　三、器材顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，生理鹽水；結(jié)晶紫染色液，堿性復(fù)紅染色液；金黃色葡萄球菌，大腸桿菌。

　　四、操作步驟

　　1、涂片

　　取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無(wú)菌操作（參照實(shí)驗(yàn)一），分別挑取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調(diào)勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時(shí)不宜過(guò)多，涂片必須均勻。

　　2、干燥于室溫中自然干燥。

　　3、固定涂片面向上，于火焰上通過(guò)2—3次，使細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)菌的形態(tài)，并使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細(xì)菌形態(tài)將毀壞。

　　4、染色放標(biāo)本于水平位置，分別滴加染色液于涂片薄膜上，染色時(shí)間長(zhǎng)短隨不同染色液而定。結(jié)晶紫染色液染2—3分鐘，石炭酸復(fù)紅染色液約染1—2分鐘。

　　5、水洗

　　染色時(shí)間到后，用自來(lái)水沖洗，直至沖下之水無(wú)色時(shí)為止。注意沖洗水流不宜過(guò)急，過(guò)大，水由玻片上端流下，避免直接沖在涂片處。沖洗后，將標(biāo)本晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，待完全干燥后才可置油鏡下觀察。

　　6、鏡檢

　�。�1）、低倍鏡觀察

　�。�2）、高倍鏡觀察

　�。�3）、油鏡觀察

　�、儆么终{(diào)節(jié)器將鏡筒提起約2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。

　�、谠诓Ｆ瑯�(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。

　　③從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在香柏油中，其鏡頭幾乎與標(biāo)本相接，應(yīng)特別注意不能壓在標(biāo)本上，更不可用力過(guò)猛，否則不僅壓碎玻片，也會(huì)損壞鏡頭。④從接目鏡內(nèi)觀察，進(jìn)一步調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野出現(xiàn)物像為止，然后用細(xì)調(diào)節(jié)器校正焦距。如油鏡已離開(kāi)油面而仍未見(jiàn)物像，必須再?gòu)膫?cè)面觀察，將油鏡降下，重復(fù)操作至物像看清為止。

　　用同樣的方法觀察枯草芽孢桿菌染色標(biāo)本。

　�、萦^察完畢，上旋鏡筒。先用擦鏡紙拭去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。切忌用手或其他紙擦鏡頭，以免損壞鏡頭。用綢布擦凈顯微鏡的金屬部件。

　�、迣⒏鞑糠诌�原，反光鏡垂直于鏡座，將接物鏡轉(zhuǎn)成八字形，再向下旋。同時(shí)把聚光鏡降下，以免接物鏡與聚光鏡發(fā)生碰撞危險(xiǎn)。

　　五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　1．結(jié)果：繪出你所觀察到的經(jīng)單染色的兩種細(xì)菌形態(tài)圖。（注明物鏡放大倍數(shù)和總放大率）

　　2．思考題

　　P18思考題1、P28思考題2、3

　　（1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)，你認(rèn)為制備染色標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

　　（2）制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？

　�。�3）在明視野顯微鏡下，觀察細(xì)菌形態(tài)時(shí)，你認(rèn)為用染色標(biāo)本好，還是用未染色的活標(biāo)本好，為什么？

　　使用油鏡按下列步驟操作：

　　1、先用粗調(diào)節(jié)旋鈕將鏡筒提升（或?qū)⑤d物臺(tái)下降）約2cm，并將高倍鏡轉(zhuǎn)出。

　　2、在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。

　　3、從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)旋鈕將載物臺(tái)緩緩地上升，（或鏡筒下降），使油浸物鏡浸入香柏油中，使鏡頭幾乎與標(biāo)本接觸。

　　4、從接目鏡內(nèi)觀察，放大視場(chǎng)光闌及聚光鏡上的虹彩光圈（帶視場(chǎng)光闌油鏡開(kāi)大視場(chǎng)光闌），上調(diào)聚光器，使光線充分照明。用粗調(diào)節(jié)旋鈕將載物臺(tái)徐徐下降（或鏡筒上升），當(dāng)出現(xiàn)物像一閃后改用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至最清晰為止。如油鏡已離開(kāi)油面而仍未見(jiàn)到物象，必須再?gòu)膫?cè)面觀察，重復(fù)上述操作。

　　5、觀察完畢，下降載物臺(tái)，將油鏡頭轉(zhuǎn)出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許乙醚酒精混合液（乙醚2份，純酒精3份）或二甲苯，擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用擦鏡紙擦拭2—3下即可，（注意向一個(gè)方向擦拭）。

　　6、將各部分還原，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭不與載物臺(tái)通光孔相對(duì)，而是成八字形位置，再將鏡筒下降至最低，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，用一個(gè)干凈手帕將接目鏡罩好，以免目鏡頭沾污灰塵。最后用柔軟紗布清潔載物臺(tái)等機(jī)械部分，然后將顯微鏡放回柜內(nèi)或鏡箱中。

　　六、實(shí)驗(yàn)總結(jié)

　　實(shí)驗(yàn)三、細(xì)菌的革蘭氏染色

　　一、目的要求

　　了解革蘭氏染色的原理，學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色的方法。

　　二、基本原理

　　革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立的。革蘭氏染色法（Gramstain）不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，用G+表示；染色反應(yīng)呈紅色（復(fù)染顏色）的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌，用G-表示。

　　三、器材

　　大腸桿菌，金黃色葡萄球菌；草酸銨結(jié)晶紫，番水水溶液，碘液，95%乙醇，載玻片，顯微鏡等。

　　四、操作步驟

　　1．涂片將培養(yǎng)24小時(shí)的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別作涂片（注意涂片切不可過(guò)于濃厚），干燥、固定。固定時(shí)通過(guò)火焰1～2次即可，不可過(guò)熱，以載玻片不燙手為宜。

　　2．染色

　　（1）初染加草酸銨結(jié)晶紫一滴，約一分鐘，水洗。

　�。�2）媒染滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約一分鐘，水洗。

　�。�3）脫色將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現(xiàn)紫色時(shí)為止，約20～30秒鐘，立即用水沖凈酒精。

　�。�4）復(fù)染用番紅液染1～2分鐘，水洗。

　�。�5）鏡檢干燥后，置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。以分散開(kāi)的細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)，過(guò)于密集的細(xì)菌，常常呈假陽(yáng)性。

　�。�6）同法在一載玻片上以大腸桿菌與金黃色葡萄球菌混合制片，作革蘭氏染色對(duì)比。

　　革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度，如脫色過(guò)度，則陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時(shí)，陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。

　　五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　1．結(jié)果

　　在你所作的革蘭氏染色制片中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌各染成何色？它們是革蘭氏陰性菌還是革蘭氏陽(yáng)性菌

　　2．思考題

　　P30思考題1、2、4

　�。�1）作革蘭氏染色涂片為什么不能過(guò)于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？

　　（2）當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠？

　　六、實(shí)驗(yàn)總結(jié)

　　20**級(jí)制藥專業(yè)工業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　姓名:劉甜甜學(xué)號(hào):20**304090

　　班級(jí):制藥**-2班指導(dǎo)老師：王健

　　日期：20**.6.11